從某一特定組織細(xì)胞中獲得高質(zhì)量的microRNA。 microRNAs(miRNA)是一類21~23核苷酸小非編碼RNAs,其通過與靶基因的3'非翻譯區(qū)間結(jié)合抑制靶基因表達(dá),或者使靶基因轉(zhuǎn)錄本降解,起到調(diào)節(jié)子的作用,具有基因表達(dá)調(diào)控功能。
技術(shù)方法:
采用Ambion的mirVana miRNA Isolation Kit來對細(xì)胞或者組織樣品進(jìn)行miRNA的抽提。該試劑盒采用了改良的玻璃纖維濾膜方法來快速回收樣品中的全部RNA,其中也包括miRNA。運(yùn)用變性裂解液、酸-酚:氯仿處理,然后通過玻璃纖維濾膜來純化總RNA再用膠純化富集miRNA,這樣可以準(zhǔn)確定量RNA來估計(jì)質(zhì)量,確認(rèn)用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的可靠性。針對于甲醛固定石蠟包埋(FFPE)的組織,我們可以采用Ambion的RecoverALL Total Nucleic Acid Isolation Kit,這個(gè)試劑盒可以專門提取FFPE樣品中DNA、RNA,其中也包括了全部的miRNA,可直接用于miRNA表達(dá)圖譜分析。如果是針對于抗凝的全血,我們可以是用Ambion的RiboPure-Blood Kit來提取小分子RNA。另外我們還可以使用mirVana PARIS Kit來直接提取樣品中的天然蛋白和所有的RNA,包括小分析RNA(miRNA、snRNA和snoRNA),從而滿足研究者研究miRNA的同時(shí)觀察蛋白水平關(guān)聯(lián)的要求。 應(yīng)用領(lǐng)域: 組織細(xì)胞中microRNA的定性、定量研究,基因表達(dá)調(diào)控研究。涉及到分子遺傳學(xué)和疾病基因組學(xué)等多個(gè)研究領(lǐng)域。
樣本要求:
新鮮血液/組織/培養(yǎng)細(xì)胞(離體/收集后非冷凍狀態(tài)下0.5-2小時(shí)內(nèi))、液氮保存的組織/分離白細(xì)胞/培養(yǎng)細(xì)胞、RNAlater充分浸透保護(hù)的組織/分離白細(xì)胞/培養(yǎng)細(xì)胞(低溫保存一個(gè)星期之內(nèi))、Trizol充分裂解后的組織/分離白細(xì)胞/培養(yǎng)細(xì)胞(低溫保存3天之內(nèi))、經(jīng)福爾馬林固定的組織石蠟包埋塊(優(yōu)先)或石蠟切片。 服務(wù)內(nèi)容:
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