多個(gè)SNP位點(diǎn)(3-8個(gè))的分型項(xiàng)目,樣本量可以幾百個(gè)到上千個(gè)。
技術(shù)方法:
連接酶檢測(cè)反應(yīng) (ligase detection reaction,LDR)是利用高溫連接酶實(shí)現(xiàn)對(duì)基因多態(tài)性位點(diǎn)的識(shí)別。高溫連接酶一旦檢測(cè)到DNA與互補(bǔ)的兩條寡聚核苷酸接頭對(duì)應(yīng)處存在著基因點(diǎn)突變類型的堿基錯(cuò)配,則連接反應(yīng)就不能進(jìn)行。 如下左圖:右邊的探針與模板有一個(gè)堿基不配對(duì),所以連接反應(yīng)不能進(jìn)行,沒有連接產(chǎn)物;左邊的探針與模板DNA完全互補(bǔ),故進(jìn)行連接反應(yīng)。通過溫控循環(huán)該特異性連接反應(yīng)可反復(fù)進(jìn)行,達(dá)到線性擴(kuò)增的效果。當(dāng)檢測(cè)到DNA與互補(bǔ)的兩條寡聚核昔酸接頭對(duì)應(yīng)處存在著堿基錯(cuò)配,則連接反應(yīng)就不能進(jìn)行。在同時(shí)存在著熒光標(biāo)記的探針時(shí),由于前者與模板DNA互補(bǔ),故它與下游探針的連接反應(yīng)得以進(jìn)行,而后者則無法與下游探針連接。在連接反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行測(cè)序儀檢測(cè),檢測(cè)到的結(jié)果即為G,從而可認(rèn)定該SNP位點(diǎn)為G。LDR檢測(cè)方法利用長(zhǎng)度差異可以將多重LDR產(chǎn)物在ABI測(cè)序系統(tǒng)中進(jìn)行檢測(cè),實(shí)現(xiàn)一次檢測(cè)多個(gè)SNP位點(diǎn)。 應(yīng)用領(lǐng)域: 本方法適用于多個(gè)涉及到SNP分型的遺傳研究領(lǐng)域。
檢測(cè)對(duì)象:
基因組DNA 服務(wù)內(nèi)容:
檢測(cè)實(shí)例:
2個(gè)樣品的7個(gè)SNP位點(diǎn)分型圖 |