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DNA抽提

       從各種來源的含基因組DNA的樣本中提取分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)需要的基因組DNA。
 
技術(shù)方法:
針對(duì)不同樣品類型進(jìn)行預(yù)處理后,使用蛋白酶K,RNase A以及SDS進(jìn)行細(xì)胞裂解及蛋白降解,經(jīng)酚-氯仿-異戊醇抽提后用無水乙醇沉淀析出基因組DNA,后用1X TE溶解,獲得高質(zhì)量基因組DNA。對(duì)需要后續(xù)用于特殊高成本實(shí)驗(yàn)如芯片雜交、二代測(cè)序等的樣本DNA抽提,我們將視需要在普通抽提過程的基礎(chǔ)上做適當(dāng)修改,可通過挑取絲狀析出物、充分洗滌過夜、再沉淀、溶解等步驟獲取最高質(zhì)量DNA。根據(jù)客戶要求我們可以使用客戶提供的特定試劑盒進(jìn)行抽提,并做后續(xù)DNA質(zhì)控。
 
應(yīng)用領(lǐng)域:
涉及到分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、基因組學(xué)的幾乎所有以DNA為分析對(duì)象的實(shí)驗(yàn)研究領(lǐng)域。
 
樣本要求:
新鮮抗凝全血(非肝素抗凝)、冷凍抗凝全血(非肝素抗凝)、白細(xì)胞懸濁液、口腔刮棒(口水)、石蠟切片、蠟塊組織、羊水、指甲、毛囊、精液(精斑)、血卡、新鮮組織、腹水等,特殊樣本請(qǐng)先咨詢。
 
服務(wù)內(nèi)容:
  1. 根據(jù)不同樣品特點(diǎn)和后續(xù)實(shí)驗(yàn)DNA要求抽提基因組DNA并進(jìn)行質(zhì)控。
  2. 電泳質(zhì)檢(附加免費(fèi)服務(wù)):瓊脂糖凝膠電泳。此方法更加直觀的了解樣本DNA有效濃度、降解程度、溶解程度以及蛋白污染程度。
  3. 精確定量并標(biāo)化:根據(jù)客戶要求,可以利用熒光分子嵌入DNA雙鏈發(fā)光原理對(duì)樣本DNA進(jìn)行精確定量,標(biāo)化到適當(dāng)濃度,滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求,并利用PCR反應(yīng)檢測(cè)樣本DNA的PCR擴(kuò)增有效性。
  4. 分光光度計(jì)質(zhì)檢:根據(jù)客戶要求,采用Eppendorf Biophotometerplus對(duì)高質(zhì)量要求的DNA樣本進(jìn)行A230、A260、A280、A340數(shù)值的檢測(cè),計(jì)算樣本DNA濃度、A260/A280以及A260/A230的數(shù)值。
 
 
檢測(cè)實(shí)例:
 
  1. 抗凝外周血抽提DNA電泳圖:

marker(Lambda DNA/EcoRI+HindIII)
 
  1. 抽提得到的基因組DNA進(jìn)行PCR質(zhì)量驗(yàn)證:

 
 
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