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cDNA制備

       從某一特定組織細胞中獲得的總RNA作為模板利用反轉(zhuǎn)錄酶進行反轉(zhuǎn)錄成為cDNA。
 
技術(shù)方法:
利用polyT(24),隨機引物N9或基因特異性引物和M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶進行cDNA的合成,一次反應RNA用量為1ug, 反應體系為20μl。反轉(zhuǎn)錄引物的選擇根據(jù)具體實驗要求而定,通常情況下采用polyT+N9, 對于只研究有限基因的項目,可采用基因特異性引物。利用cDNA特異的POLR2A擴增引物對反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行擴增質(zhì)檢。有特殊要求請來電咨詢。


應用領(lǐng)域: 涉及分子生物學和基因組學表達水平分析及基因功能研究的以RNA為分析對象的實驗研究領(lǐng)域。
 
樣本要求:
不同組織細胞來源的總RNA, 要求有清晰的電泳圖片。
 
服務(wù)內(nèi)容:
  1. 獲得以客戶提供的總RNA為模板的cDNA。
  2. 取1μl 10倍稀釋的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,用GAPDH引物擴增檢驗質(zhì)量。
檢測實例
瓊脂糖凝膠電泳檢測 針對cDNA利用POLR2A引物擴增的產(chǎn)物。
     M   1     2     3    4    5    6     7    8     9    10   M         
 
  
Marker為DL500,1-10號為10個逆轉(zhuǎn)錄樣本,POLR2A擴增片段大小為126bp。
 
 
 
 
依所用引物不同有以下幾種轉(zhuǎn)錄方式
隨機引物N9

 
 
 
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