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cDNA常規(guī)測(cè)序

       以特定組織或者細(xì)胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄成的cDNA為擴(kuò)增和測(cè)序模板,獲取候選基因的突變位點(diǎn)信息,還可檢測(cè)到引起非正常剪切的功能突變位點(diǎn)。
 
技術(shù)方法:
設(shè)計(jì)特異引物進(jìn)行全長(zhǎng)cDNA擴(kuò)增,后采用美國(guó)Life technologies公司的BigDye試劑盒對(duì)純化后的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序(同基因組DNA常規(guī)測(cè)序),如果有多種剪切體,先割膠分離純化,然后分別測(cè)序。與基因組DNA常規(guī)測(cè)序相比,cDNA測(cè)序可以大大減少測(cè)序反應(yīng)數(shù)目,節(jié)約成本,而且可以檢測(cè)到引起非正常剪切的明確的功能突變位點(diǎn),不管該位點(diǎn)是剪切點(diǎn)突變、同義突變還是內(nèi)含子突變,但是很多情況下,很難獲得目標(biāo)基因表達(dá)的組織樣本,同時(shí)也得注意由于嚴(yán)重等位基因不平衡表達(dá)造成的假陰性結(jié)果。
 
應(yīng)用領(lǐng)域:
單基因多基因遺傳疾病的基因突變檢測(cè)、藥物代謝相關(guān)基因突變檢測(cè)、腫瘤相關(guān)基因的體細(xì)胞突變檢測(cè)等
 
樣本要求:
以表達(dá)候選基因的總RNA反轉(zhuǎn)錄而成的高質(zhì)量cDNA
 
服務(wù)內(nèi)容:
  1. mRNA反轉(zhuǎn)錄成為cDNA;
  2. 候選基因序列查詢、全長(zhǎng)cDNA擴(kuò)增及測(cè)序引物設(shè)計(jì)、合成與優(yōu)化;
  3. 全長(zhǎng)cDNA擴(kuò)增、多種剪切體分離與純化;
  4. 全長(zhǎng)cDNA擴(kuò)增產(chǎn)物的序列測(cè)定;
  5. 判讀測(cè)序結(jié)果,讀取突變位點(diǎn);
  6. 突變位點(diǎn)數(shù)據(jù)整理、分析以及突變位點(diǎn)測(cè)序圖制作。
 
服務(wù)時(shí)間:
通常情況下,<30樣本一個(gè)基因全長(zhǎng)cDNA測(cè)序需20個(gè)工作日
 
檢測(cè)實(shí)例:
 

cDNA測(cè)序原理圖
 
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