以特定組織或者細(xì)胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄成的cDNA為擴(kuò)增和測(cè)序模板,獲取候選基因的突變位點(diǎn)信息,還可檢測(cè)到引起非正常剪切的功能突變位點(diǎn)。
技術(shù)方法:
設(shè)計(jì)特異引物進(jìn)行全長(zhǎng)cDNA擴(kuò)增,后采用美國(guó)Life technologies公司的BigDye試劑盒對(duì)純化后的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序(同基因組DNA常規(guī)測(cè)序),如果有多種剪切體,先割膠分離純化,然后分別測(cè)序。與基因組DNA常規(guī)測(cè)序相比,cDNA測(cè)序可以大大減少測(cè)序反應(yīng)數(shù)目,節(jié)約成本,而且可以檢測(cè)到引起非正常剪切的明確的功能突變位點(diǎn),不管該位點(diǎn)是剪切點(diǎn)突變、同義突變還是內(nèi)含子突變,但是很多情況下,很難獲得目標(biāo)基因表達(dá)的組織樣本,同時(shí)也得注意由于嚴(yán)重等位基因不平衡表達(dá)造成的假陰性結(jié)果。 應(yīng)用領(lǐng)域: 單基因多基因遺傳疾病的基因突變檢測(cè)、藥物代謝相關(guān)基因突變檢測(cè)、腫瘤相關(guān)基因的體細(xì)胞突變檢測(cè)等
樣本要求:
以表達(dá)候選基因的總RNA反轉(zhuǎn)錄而成的高質(zhì)量cDNA 服務(wù)內(nèi)容:
服務(wù)時(shí)間: 通常情況下,<30樣本一個(gè)基因全長(zhǎng)cDNA測(cè)序需20個(gè)工作日
檢測(cè)實(shí)例:
cDNA測(cè)序原理圖 |