針對目的個體在已知的DNA區(qū)段或者候選基因區(qū)域進行序列測定,獲得區(qū)域的序列并尋找未知的突變或者多態(tài)。
技術方法:
針對目的片段進行特異性擴增引物設計,利用引物對目的片段進行PCR擴增,后采用美國Life technologies公司的BigDye試劑盒對純化后的擴增產物進行序列測定(見圖1)。該測序的基本原理是雙脫氧終止法,在測序反應體系中含有四種dNTP以及一定比例的標記不同熒光的四種ddNTP, 在測序聚合酶作用下,結合在PCR產物模板上的測序引物開始延伸,由于ddNTP的隨機摻入,不同PCR產物模板分子上的延伸反應可隨機停留在整個序列的不同位置,這些由于3’端熒光ddNTP的摻入而帶上特定熒光的不同長度延伸產物在ABI測序儀(3130XL, 3730XL)上經毛細管電泳獲得分離,通過分析一系列長度片段的熒光信號可以獲知目標片段上的序列組成。 圖一:測序突變篩查原理圖。 應用領域: 單基因多基因遺傳疾病的基因突變檢測、藥物代謝相關基因突變檢測、候選基因多態(tài)位點檢測及遺傳結構分析、腫瘤相關基因的體細胞突變檢測、耐藥微生物菌株的突變檢測等
樣本要求:
不同來源的基因組DNA,可以來自血液、組織或各種病原微生物等。 服務內容: 1、目標基因序列查詢、特異引物設計、合成與優(yōu)化; 2、目的片段的擴增、純化; 3、PCR擴增產物測序; 4、判讀測序結果,讀取突變或多態(tài)位點; 5、突變(SNP)位點數據整理、分析以及突變位點測序圖制作; 6、對于候選基因多態(tài)位點檢測項目,提供LD map分析、單倍型推斷以及tagSNP位點篩選。 服務時間: 通常情況下,<30樣本一個基因測序需15個工作日
檢測實例:
1.查找序列,標注基因,待查位點,設計引物。 2.利用軟件對測序結果進行分析,在不同個體中尋找序列差異和突變位點。 3. 準確提供篩查到的突變/SNP信息(非真實數據,僅供模式參考) 4. 可直接提供連鎖不平衡結構分析圖 。
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