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已知的很多SNP位點(diǎn)正好位于限制性內(nèi)切酶的識(shí)別區(qū)域，針對(duì)這些SNP位點(diǎn)我們就可以使用此方法進(jìn)行SNP分型。尤其是對(duì)于大樣品量的多個(gè)SNP分型來說，此方法的優(yōu)勢(shì)較為明顯。
技術(shù)方法：
RFLP技術(shù)于1980年由人類遺傳學(xué)家Bostein提出。它是第一代DNA分子標(biāo)記技術(shù)。Donis—Keller利用此技術(shù)于1987年構(gòu)建成第一張人的遺傳圖譜。DNA分子水平上的多態(tài)性檢測(cè)技術(shù)是進(jìn)行基因組研究的基礎(chǔ)。已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位以及生物進(jìn)化和分類的研究。RFLP是根據(jù)不同品種（個(gè)體）基因組的限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)堿基發(fā)生突變，或酶切位點(diǎn)之間發(fā)生了堿基的插入、缺失，導(dǎo)致酶切片段大小發(fā)生了變化，通過電泳將其區(qū)分?，F(xiàn)在我們用熒光標(biāo)記其PCR引物，通過測(cè)序毛細(xì)管電泳來精確區(qū)分酶切片段大小，精度可以達(dá)到1bp的差異。通過對(duì)同一個(gè)位點(diǎn)的PCR產(chǎn)物不同SIZE的引物設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)了多樣本的多重酶切，大大降低了檢測(cè)成本。 我們可以利用限制性內(nèi)切酶的特殊屬性來對(duì)一些SNP進(jìn)行分型。有些SNP多態(tài)位點(diǎn)正好處于限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)處，其中一種多態(tài)對(duì)應(yīng)的PCR擴(kuò)增片斷能夠被相應(yīng)的內(nèi)切酶切動(dòng)，而另一種卻不能，因此通過對(duì)酶切后的PCR產(chǎn)物電泳后的片斷長(zhǎng)度分析可知檢測(cè)樣本在該位點(diǎn)處的基因型。如果檢測(cè)SNP位點(diǎn)不存在合適的酶切位點(diǎn)，往往可以通過在PCR引物3’端改變個(gè)別堿基引入限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)，通過這種引物修飾法可以實(shí)現(xiàn)絕大多數(shù)SNP位點(diǎn)的分型都能用RFLP分析來實(shí)現(xiàn)。整個(gè)技術(shù)的示意圖(以KpnI酶切位點(diǎn)SNP為例)如下：  現(xiàn)在我們通過熒光標(biāo)記PCR引物中的一條引物，另一條引物設(shè)計(jì)在序列的不同位置實(shí)現(xiàn)了，多位點(diǎn)擴(kuò)增，多樣本一起酶切，酶切PCR產(chǎn)物通過跑測(cè)序毛細(xì)管電泳將其精確區(qū)分，大大降低其檢測(cè)成本。 應(yīng)用領(lǐng)域： 本方法涉及到很多需要對(duì)突變或者SNP多態(tài)進(jìn)行分型的遺傳研究領(lǐng)域。
檢測(cè)對(duì)象：
DNA 服務(wù)內(nèi)容：
檢測(cè)實(shí)例：
1. 4個(gè)位點(diǎn)，三個(gè)樣本SNP分析圖  2. 1個(gè)位點(diǎn)，三個(gè)樣本SNP分析圖  3. 1個(gè)位點(diǎn)，一個(gè)樣本SNP分析圖  |
