本方法非常適合單個(gè)位點(diǎn)大量樣品的已知SNP的基因分型研究。
技術(shù)方法:
此技術(shù)是由美國(guó)Life technologies公司研發(fā)的SNP分型技術(shù),其技術(shù)原理如下簡(jiǎn)介。PCR 反應(yīng)時(shí),加入一對(duì)兩端有不同熒光標(biāo)記的特異探針來(lái)識(shí)別不同的等位基因(allele1和allele2),5’端為報(bào)告熒光基團(tuán)(reporter),3’端為淬滅熒光基團(tuán) (quencher)。PCR過(guò)程中,兩個(gè)探針能與正向引物和反向引物之間的互補(bǔ)序列特異退火結(jié)合。當(dāng)探針以完整形式存在時(shí),由于能量共振轉(zhuǎn)移,熒光基團(tuán)只發(fā)出微弱熒光。特異的探針與相應(yīng)的等位基因雜合后,DNA聚合酶發(fā)揮5’到3’外切酶活性,把報(bào)告熒光基團(tuán)切割下來(lái),脫離了3’端淬滅熒光基團(tuán)的淬滅作用 (quench),從而發(fā)出熒光。兩個(gè)探針的5’端標(biāo)有不同的熒光 (FAM或VIC),3’端標(biāo)有MGB 淬滅基團(tuán)結(jié)合體。根據(jù)檢測(cè)到的不同熒光,可以判斷相應(yīng)的樣本的SNP 等位基因型。 整個(gè)技術(shù)的示意圖如下: 應(yīng)用領(lǐng)域: 本方法適用于多個(gè)涉及到SNP分型的遺傳研究領(lǐng)域。尤其適合針對(duì)全基因組SNP關(guān)聯(lián)研究獲得的初步陽(yáng)性位點(diǎn),以及全基因組測(cè)序得到的大量初篩突變位點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)一步的大樣品驗(yàn)證研究。
檢測(cè)對(duì)象:
基因組DNA 服務(wù)內(nèi)容:
檢測(cè)實(shí)例:
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