|
AmpAll®試劑盒主要用于基因組DNA的全基因組擴(kuò)增。
利用等溫聚合酶的獨(dú)特性質(zhì)，在恒溫下實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本全基因組DNA的高產(chǎn)量和高質(zhì)量的均勻擴(kuò)增。該特殊DNA聚合酶具有與模板很強(qiáng)的結(jié)合能力，能在結(jié)合的模板上連續(xù)延伸70kb以上, 這使得擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度可達(dá)100kb。同時(shí)，這種酶具有3’-> 5’外切酶活性，錯(cuò)誤率僅為5 x 10-6，大約比Taq DNA聚合酶低100倍，這保證了擴(kuò)增的高保真性。該試劑盒要求模板DNA不能?chē)?yán)重降解，而且每個(gè)反應(yīng)的模板DNA用量最好大于20ng，以減少因模板量太少而造成等位基因的不平衡擴(kuò)增。正常情況下，20 µl的反應(yīng)體系可產(chǎn)生>10µg的擴(kuò)增產(chǎn)物，可稀釋50倍后用于后續(xù)的DNA分析。
基因組擴(kuò)增試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
DNA抽提結(jié)果：  （1）REPLI-g UltraFast Mini Kit（25），實(shí)驗(yàn)后按說(shuō)明書(shū)1：25稀釋。 （2）AmpAll® 全基因組擴(kuò)增試劑盒——DNA，實(shí)驗(yàn)后按說(shuō)明書(shū)原位5被稀釋?zhuān)龊罄m(xù)實(shí)驗(yàn)再進(jìn)行10被稀釋。 （考慮到A-2和重采樣本原液濃度比較低，做擴(kuò)增的時(shí)候加了5ul模板，A-1和正常樣本取1ul模板。） （3）AmpAll® 全基因組擴(kuò)增試劑盒——毛囊，實(shí)驗(yàn)后按說(shuō)明書(shū)原位3被稀釋?zhuān)龊罄m(xù)實(shí)驗(yàn)再進(jìn)行10被稀釋。（兩個(gè)毛囊） 取上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果5ul跑電泳，DL2000 marker是1ul。 
試劑盒定制流程：
試劑盒中包括具體的試劑說(shuō)明、標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)體系條件。 |
