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母血污染評估產(chǎn)前診斷標(biāo)準(zhǔn)化第一步
除去孕早、中期的流產(chǎn)、胎死宮內(nèi)以外，約3-5%的出生嬰兒存在出生缺陷（包括身體結(jié)構(gòu)或智力缺陷）。其中0.5%為染色體異常疾病，1.8%為單基因遺傳疾病，2.6%為多基因疾病。而在所有圍產(chǎn)期死亡中，先天性缺陷占20%-25%。在所有的活產(chǎn)兒染色體異常疾病中，以唐氏綜合征（21-三體綜合征）最為常見，其次是染色體18-三體綜合征和13-三體綜合征。孕期若孕檢（血清學(xué)、無創(chuàng)）高危、B超顯示有畸形或是高齡產(chǎn)婦的情況下，需對胎兒的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常進(jìn)行產(chǎn)前診斷，避免有缺陷的患兒出生。對于單基因遺傳病，除了致死性的，一般都可正常分娩，但出生后，根據(jù)突變的基因表現(xiàn)出不同的疾病癥狀，如：先天性耳聾、假肥大性肌營養(yǎng)不良、血友病、脆性X、苯丙酮尿癥等等。在夫妻雙方一方有疾病發(fā)生（疾病是常染色體顯性或伴性遺傳?。┗螂p方已產(chǎn)下有先證者患兒的情況下，夫妻懷孕后，胎兒也需做單基因遺傳病方面的產(chǎn)前診斷，實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育。
臨床上，一般產(chǎn)前診斷會(huì)根據(jù)孕期來選擇取胎兒細(xì)胞的方法，在孕早期可采用絨毛穿刺活檢術(shù)，孕中期可行羊水穿刺術(shù)，孕晚期可采集臍帶血。在采集這些標(biāo)本時(shí)，無論選擇哪種采樣方式，都存在胎兒細(xì)胞在穿刺中受到母體細(xì)胞污染（maternal cells contamination, MCC）的可能。在自然流產(chǎn)后取胚胎絨毛做胚胎染色體檢測以查找病因時(shí)，也存在取到胎盤組織或母體蛻膜組織而污染胚胎絨毛的可能。而以上這些情況都有可能會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的診斷結(jié)果而引起醫(yī)療糾紛。
研究發(fā)現(xiàn)，單胎妊娠MCC的發(fā)生率主要取決于取樣方式、施術(shù)者水平等。一般認(rèn)為絨毛穿刺取樣術(shù)中MCC發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)大于羊膜腔穿刺羊水取樣術(shù)中MCC的發(fā)生率。有國外文獻(xiàn)報(bào)道指出，未經(jīng)培養(yǎng)的孕中期羊水標(biāo)本MCC發(fā)生率高達(dá)9.4%，經(jīng)過培養(yǎng)的羊水標(biāo)本MCC發(fā)生率達(dá)2.8%。
國內(nèi)也有做過類似研究，河南省人民醫(yī)院在2011年10月至2012年1月期間對521例孕中期（18-26周）孕婦，58例孕早期（11-13周）孕婦，分別進(jìn)行羊膜腔穿刺術(shù)或絨毛穿刺取樣術(shù)取得胎兒組織標(biāo)本。在采用美國Promega公司STR系統(tǒng)對所有DNA標(biāo)本進(jìn)行STR分型檢測后發(fā)現(xiàn)，3.1%（16/519）未經(jīng)培養(yǎng)的羊水標(biāo)本存在MCC， 1.3%（7/519）培養(yǎng)后的羊水標(biāo)本存在MCC；5%（3/57）未經(jīng)培養(yǎng)的絨毛標(biāo)本存在MCC， 其中1例完全為母親來源DNA而中途放棄培養(yǎng)，其他2例培養(yǎng)后仍然存在污染。總體上，如果不進(jìn)行MCC排除將有0.6%的羊水標(biāo)本和4%的絨毛標(biāo)本得到錯(cuò)誤的核型結(jié)果。在對19例未經(jīng)培養(yǎng)的羊水和絨毛標(biāo)本進(jìn)行核型分析和染色體非整倍體的MLPA檢測后發(fā)現(xiàn)，MCC對正常女性胎兒核型分析無影響，并且MLPA結(jié)果也顯示無異常，而對男性胎兒MCC污染程度>10%的標(biāo)本，核型分析有性染色體嵌合體的表現(xiàn)，并且染色體非整倍體MLPA分析結(jié)果表現(xiàn)為X染色體探針比例升高，提示X染色體拷貝數(shù)異?；騇CC。這4例男性胎兒在排除污染后再次分析均為正常男性胎兒，因此，在常規(guī)染色體核型分析中，MCC對于正常核型女性胎兒無明顯影響，但是卻增加了異常核型胎兒被誤判為異常/正常嵌合體或者男性胎兒被誤判為兩性嵌合體的風(fēng)險(xiǎn)。并且該研究再次顯示，即使是離心后非血性污染的羊水樣本仍可能存在MCC。
該研究對于單基因遺傳病還進(jìn)行了體外模擬實(shí)驗(yàn)，分別模擬10%、20%、30%（正常女性/患者基因組DNA的質(zhì)量百分率）MCC對DMD基因外顯子缺失型MLPA檢測結(jié)果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：10%的污染在MLPA檢測中即可有明顯反映，30%時(shí)DMD缺失型患者表現(xiàn)為雜合缺失。
研究發(fā)現(xiàn)，對于基于PCR原理的基因定性分析，10%MCC即可造成錯(cuò)誤的分析結(jié)果；對于基因定量分析10%及以上的MCC即可能對分子遺傳學(xué)診斷結(jié)果產(chǎn)生干擾，30%MCC可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的診斷結(jié)果。一方面，產(chǎn)前診斷所涉及到的檢測方法，如：PCR、MLPA等技術(shù)都是檢測敏感度很高的檢測技術(shù)；另一方面，產(chǎn)前分子診斷的單基因遺傳病前設(shè)風(fēng)險(xiǎn)概率通常是25%或50%，并且母親是否為攜帶者、胎兒性別也會(huì)影響最終檢測的準(zhǔn)確性。由此可見，分子遺傳學(xué)的產(chǎn)前診斷風(fēng)險(xiǎn)值遠(yuǎn)高于最常見的細(xì)胞遺傳學(xué)疾病風(fēng)險(xiǎn)值。因此，產(chǎn)前分子遺傳學(xué)診斷的誤診風(fēng)險(xiǎn)也相應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于細(xì)胞遺傳學(xué)診斷，MCC對于分子遺傳學(xué)診斷結(jié)果的影響可能更為突出。
鑒于MCC對產(chǎn)前分子遺傳學(xué)診斷的巨大影響以及可能造成的嚴(yán)重后果，國際上對此也做了相應(yīng)的規(guī)定。ACMG和加拿大醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)協(xié)會(huì)，已經(jīng)建議產(chǎn)前分子遺傳學(xué)診斷應(yīng)當(dāng)同時(shí)平行檢測母親和胎兒組織標(biāo)本以排除MCC的潛在影響。2008年，英國臨床分子遺傳協(xié)會(huì)（CMGS）制訂了產(chǎn)前診斷標(biāo)本分子檢測母體細(xì)胞污染的檢測規(guī)范。在規(guī)范中明確建議所有單基因病的產(chǎn)前診斷結(jié)果必須包括母體細(xì)胞污染的鑒別實(shí)驗(yàn)。自2009年起,河南省人民醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心在質(zhì)量控制作業(yè)指導(dǎo)書中已經(jīng)明確規(guī)定,所有核型結(jié)果為嵌合體的羊水標(biāo)本或可疑MCC的絨毛標(biāo)本必須進(jìn)行MCC排除實(shí)驗(yàn)(胎兒、母親STR分型或者改變?nèi)臃桨冈俅稳雍藢?shí)）方可最終向患者出具報(bào)告。我國專家建議，產(chǎn)前分子遺傳學(xué)診斷應(yīng)盡可能常規(guī)進(jìn)行胎兒組織標(biāo)本的MCC排除實(shí)驗(yàn)。
MCC對產(chǎn)前分子遺傳學(xué)診斷會(huì)造成深遠(yuǎn)的影響，對自然流產(chǎn)中流產(chǎn)物胚胎染色體異常檢測也會(huì)造成錯(cuò)誤的診斷結(jié)果。Lathi RB 和他的同事在對1222個(gè)流產(chǎn)分析樣本進(jìn)行回顧性MCC檢測后發(fā)現(xiàn)，原本結(jié)果為592例染色體非整倍體，630例正常核型，進(jìn)行MCC檢測后發(fā)現(xiàn)，在630例正常核型的樣本中有269例46，XX的樣本中沒有發(fā)現(xiàn)胚胎組織，即這269例其實(shí)并不是胚胎樣本而是母體樣本。在排除這269例母體樣本后，染色體異常的概率從48%上升到了62%。該研究證實(shí)，加入母血評估可使流產(chǎn)絨毛染色體檢測的結(jié)果更準(zhǔn)確。
天昊診斷的人類個(gè)體識(shí)別檢測體系采用多重?zé)晒釶CR擴(kuò)增法依托一代測序儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳，共檢測17個(gè)位點(diǎn)，其中包含10個(gè)常見的個(gè)體鑒別基因座，6個(gè)具有高雜合度的基因座和1個(gè)性別基因座?？捎糜诋a(chǎn)前診斷的早期絨毛膜、羊水和臍帶血及自然流產(chǎn)原因排查時(shí)用到的刮宮組織、流產(chǎn)組織的母血污染評估，以避免在產(chǎn)前診斷中由于母血污染而造成錯(cuò)誤的診斷結(jié)果，引起不良的生產(chǎn)結(jié)局而導(dǎo)致醫(yī)療糾紛。還可避免在自然流產(chǎn)原因排查時(shí)，由于母血污染導(dǎo)致的檢測結(jié)果錯(cuò)誤，造成病人接受不必要的其他檢查和錯(cuò)誤的治療方案。
天昊診斷利用眾多自主研發(fā)的專利技術(shù)（iMLDR®多重SNP及突變分析技術(shù)，SNPscan®高通量SNP及突變分析技術(shù)，AccuCopy®多重基因拷貝數(shù)檢測技術(shù)，CNVplex®高通量基因拷貝數(shù)檢測技術(shù)，CNVseq®超高通量基因拷貝數(shù)檢測技術(shù)，以及EasyTarget®多重基因片段快速富集技術(shù)等）致力于優(yōu)生優(yōu)育診斷領(lǐng)域的篩查和診斷。檢測產(chǎn)品涵蓋了孕前、產(chǎn)前、新生兒等不同階段的出生檢測，以求逐步降低出生缺陷的發(fā)生率。檢測產(chǎn)品包括：新無創(chuàng)TM唐氏綜合征產(chǎn)前篩查、染色體非整倍體基因檢測、染色體微缺失微重復(fù)突變檢測、男性不育相關(guān)基因突變檢測、遺傳性耳聾90項(xiàng)基因突變檢測、孕前夫婦基因突變攜帶者篩查、新生兒遺傳病基因篩查以及一些罕見的遺傳病檢測（包括：地中海貧血、血友病、假肥大型肌營養(yǎng)不良等）。天昊診斷將以“創(chuàng)新基因科技，引領(lǐng)診斷革新”為宗旨，利用公司各項(xiàng)創(chuàng)新基因檢測技術(shù)及高素質(zhì)的服務(wù)團(tuán)隊(duì)，為促進(jìn)分子診斷水平發(fā)展、提升我國人口健康素質(zhì)做出貢獻(xiàn)！
參考文獻(xiàn)：
1. 侯巧芳，廖世秀，李濤，楊艷麗，張朝陽，楚艷麗 產(chǎn)前診斷標(biāo)本的母體細(xì)胞污染及其影響，中華婦產(chǎn)科雜志2013年2月第48卷第2期
2. 張清健，鄭立新，田佩玲，葉嘉玲，楊衛(wèi)，王柏賢，徐珊珊，周冰燚，蔡慧娜，方俊宇，朱志勇 短串聯(lián)重復(fù)序列連鎖分析進(jìn)行產(chǎn)前診斷前母血污染鑒定的研究 中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué) 2015年5月 第19卷 第5期
3. Lathi Rb et al .,Reliability of 46,XX results on miscarriage specimens: a review of 1,222 first-trimester miscarriage specimens, Fertil Steril. 2014 Jan;101(1):178-82